尿酸（Uric Acid, UA）含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法 100T/96S

注　意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

UA 是鳥(niǎo)類和爬行類動(dòng)物的主要代謝產(chǎn)物，正常人體尿液中產(chǎn)物主要為尿素，含少量尿酸。此外，UA 還是重要的抗氧化劑，能清除超氧化物，羥自由基等。體內(nèi) UA 生成量和排泄量不平衡會(huì)導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生。例如，血中 UA 升高會(huì)引起痛風(fēng)、腎功能損害和動(dòng)脈硬化，相反 UA 降低會(huì)引起惡性貧血，在臨床診斷上具有重要的意義。

測(cè)定原理：

尿酸酶能催化 UA 生成尿囊素，CO2 及 H2O2，H2O2 氧化亞鐵氰hua鉀中的 Fe2+ 生成 Fe3+ ，F(xiàn)e3+進(jìn)一步與酚和 4-氨基安替比林縮合生成紅色醌類化合物，在 505nm 下有特征吸收峰，測(cè)定反應(yīng)體系 505nm 的吸收值，可計(jì)算尿酸的含量。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

恒溫水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制：

緩沖液：液體 20mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：

A：用于標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管，粉劑 1 瓶，4℃避光保存，使用前加 13mL 緩沖液溶解。

B：用于空白管，粉劑 1 瓶，4℃避光保存，使用前加 7 mL 緩沖液溶解。

試劑二：粉劑 1 管，4℃避光保存，使用前加 2mL 蒸餾水溶解，60℃加熱溶解。

樣品的制備：

1.        動(dòng)植物組織：建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 生理鹽水或蒸餾水，進(jìn)行冰浴勻漿，然后 8000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2.        血清，培養(yǎng)液：直接檢測(cè)。

測(cè)定操作表：

1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 505nm。

2、 操作表

混勻，37℃水浴 30min，取 200µL 于微量石英比色皿/96 孔板中，測(cè)定 505nm 處各管吸光值，標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管。

UV 含量計(jì)算公式：

1.    組織：

（1）按樣本重量計(jì)算

尿酸含量（μmol/g 鮮重）=C 標(biāo)準(zhǔn)品×（A 測(cè)定管－A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）÷（W÷V樣總）=0.5×（A 測(cè)定管－A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）÷W

（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算

尿酸含量（μmol/mg prot）=C 標(biāo)準(zhǔn)品×（A 測(cè)定管－A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）÷ Cpr =0.5×（A 測(cè)定管－A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）÷Cpr

尿酸（μmol/L）= C 標(biāo)準(zhǔn)品×（A 測(cè)定管－A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）×103 =500×（A 測(cè)定管－A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）

C   標(biāo)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度 0.5μmol/mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣品質(zhì)量，g ；Cpr：

樣本蛋白濃度，mg/mL；103  ：1μmol/ L=103μmol/ mL

注意事項(xiàng)：

1.    血清樣本請(qǐng)?jiān)?24 小時(shí)內(nèi)測(cè)定，或者 4℃密封避光保存不超過(guò) 72 小時(shí)。

2.    吸光值大于 0.8 可用蒸餾水稀釋樣本，并在計(jì)算公式中算入稀釋倍數(shù)。

3.    z低檢出限為 10μmol/L。