人類白細(xì)胞抗原ELISA試劑盒是一種基于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)技術(shù)的體外檢測(cè)試劑盒,主要用于定量或定性檢測(cè)人血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等生物樣本中特定HLA分子(如HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-E等)的濃度。HLA是人類主要組織相容性復(fù)合體(MHC)的編碼產(chǎn)物,位于第6號(hào)染色體短臂,廣泛參與免疫識(shí)別、抗原呈遞及移植排斥反應(yīng),在器官y植配型、自身免疫疾病研究和腫瘤免疫等領(lǐng)域具有重要意義。
該試劑盒通常采用雙抗體夾心法原理:微孔板預(yù)先包被特異性抗HLA抗體作為捕獲抗體;加入待測(cè)樣本后,HLA抗原與固相抗體結(jié)合;再加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體,形成“抗體-抗原-檢測(cè)抗體”復(fù)合物;隨后加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的親和素,通過酶催化底物顯色,顏色深淺與樣本中HLA含量成正比,最終通過酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度并計(jì)算濃度。
一、整體保存原則(必記)
核心溫度:2~8℃冷藏(冰箱冷藏室),嚴(yán)禁冷凍(-20℃),否則酶、抗體變性失活,包被板脫落。
全程避光、干燥、密封,遠(yuǎn)離熱源與陽光直射。
豎直放置,防止液體滲漏、交叉污染。
有效期:未開封6–12個(gè)月(見盒簽);開封后1–3個(gè)月內(nèi)用完。
二、未開封試劑盒(整套)
存放:2~8℃、避光、干燥、密封原包裝。
環(huán)境:濕度<60%,遠(yuǎn)離冰箱門/制冷風(fēng)口(減少溫度波動(dòng))。
禁止:不可冷凍、不可室溫久放、不可暴曬。
三、開封后各組分保存(關(guān)鍵)
1.酶標(biāo)板(96孔板)
未用完板條:連同干燥劑→鋁箔袋密封→2~8℃保存。
有效期:開封后≤1個(gè)月,受潮易長菌、影響結(jié)合效率。
禁止:冷凍、敞口、潮濕環(huán)境。
2.標(biāo)準(zhǔn)品(凍干/液體)
凍干標(biāo)準(zhǔn)品:2~8℃密封保存;復(fù)溶后分裝成小份→-20℃冷凍,避免反復(fù)凍融。
液體標(biāo)準(zhǔn)品:2~8℃,開封后1周內(nèi)用完。
3.酶結(jié)合物(HRP標(biāo)記抗體)
保存:2~8℃避光(棕色瓶或鋁箔包裹)。
長期不用:分裝后-20℃冷凍,反復(fù)凍融≤2次。
風(fēng)險(xiǎn):光/熱易致酶活性下降、背景升高。
4.顯色底物(TMB)
保存:2~8℃嚴(yán)格避光(棕色瓶、鋁箔包裹、避光盒)。
有效期:開封后1周內(nèi)用完,變藍(lán)即失效。
禁止:冷凍、光照、接觸金屬。
5.濃縮洗滌液(20×)
保存:2~8℃或室溫(15–25℃),密封防污染。
低溫結(jié)晶:37℃水浴溶解,不影響效果。
稀釋后:2~8℃保存,3天內(nèi)用完。
6.終止液(稀硫酸)
保存:2~8℃密封,防揮發(fā)、防腐蝕。
安全:?jiǎn)为?dú)存放,避免與酶/抗體接觸。
四、絕對(duì)禁忌(易踩坑)
嚴(yán)禁冷凍試劑盒整體及酶標(biāo)板(蛋白變性、包被脫落)。
避免反復(fù)凍融標(biāo)準(zhǔn)品/酶結(jié)合物(活性斷崖式下降)。
TMB底物絕對(duì)避光(光氧化→顯色異常、假陽性)。
開封后不密封/不加干燥劑(受潮長菌、板條失效)。
溫度波動(dòng)大(冰箱門頻繁開關(guān)、靠近風(fēng)口)。
五、快速記憶口訣
2–8℃冷藏不凍,避光干燥密封好;
板條干燥劑封袋,標(biāo)準(zhǔn)品分裝防融;
TMB避光別冷凍,洗滌液結(jié)晶37溶。
